實時熒光定量PCR儀是一種通過熒光信號實時檢測PCR產物的增加量，從而定量分析起始模板DNA序列的數量的技術。在使用實時熒光定量PCR儀時，注意以下事項可以保證實驗的準確性和可靠性。

樣品制備：準確的樣品制備是實時熒光定量PCR實驗的關鍵。必須嚴格控制反應體系中的起始模板DNA的數量和質量。樣品的質量受到很多因素的影響，如DNA的純度、完整性、起始濃度和存在的抑制物等。確保使用高質量的DNA提取方法，并對提取的DNA進行適當的純化和稀釋。

防止污染：實時熒光定量PCR實驗中，樣品的污染是十分常見的問題，會導致產生誤差和假陽性結果。因此，在實驗前要做好充足的準備工作，減少污染的可能性。實驗操作過程中要使用無DNase、RNase的試劑和器具，并進行良好的實驗室操作，如佩戴手套、使用濾嘴和離心管等。

引物和探針的設計：PCR引物和探針的設計是實時熒光定量PCR實驗的重要步驟。合理設計的引物和探針可以提高PCR的特異性和靈敏性，減少非特異性擴增和背景信號。確保引物和探針的質量，避免引物和探針的二聚體形成，保證引物和探針的完整性。

反應體系的配制：反應體系的配制影響PCR的靈敏度和特異性。應根據實驗需要和目的，選擇合適的PCR反應體系。反應體系中的各組分需要嚴格按照比例添加，保證每個反應的組分完全均一混合，從而保證實驗結果的復制性和可信度。

溫度控制和循環程序：實時熒光定量PCR儀需要嚴格的溫度控制和合適的循環程序，以保證PCR擴增的效率和產物的特異性。在進行實驗前根據實驗方案設置好PCR循環程序，并核對儀器是否準確。在實驗過程中要監測溫度的準確性和一致性，確保實驗結果的穩定性。

閾值和標準曲線的設定：實時熒光定量PCR分析的關鍵是準確確定閾值判斷相關熒光信號的閾值線和標準曲線。閾值設置的不準確會影響結果解讀和定量結果的可靠性。標準曲線的選擇合適的模板濃度和數量是設定準確的定量曲線的前提。

負對照和陽性對照的設置：實時熒光定量PCR實驗中，設置負對照和陽性對照是驗證實驗結果的重要措施。負對照用于檢測實驗過程中是否存在污染或假陽性結果的產生，陽性對照用于驗證實驗的可靠性和靈敏度。