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    質粒提取試劑盒與核酸提取試劑盒是否一樣?有什么區別

    2022-04-26 14:30:12

      質粒提取試劑盒核酸提取試劑盒是否一樣?有什么區別?我們通過分析給出一個答案

      1.wash buffer中加入無水乙醇后,終濃度差不多就是70%的乙醇溶液了,在沉淀的DNA中,由于過多的鹽雜質存在,影響DNA的酶切等反應,wash buffer就是洗去這些鹽雜質的.

      2.用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中常用的沉淀DNA的方法.乙醇的優點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑.DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合.一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右.因而也可改用95%乙醇來替代無水乙醇(因為無水乙醇的價格遠遠比95%乙醇昂貴).但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時,就會影響收得率.折中的做法是初次沉淀DNA時可用95%乙醇代替無水乙酵,最后的沉淀步驟要使用無水乙醇.也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA.一般在室溫下放置15-30分鐘即可.如果你沒有加無水乙醇,核酸不能沉淀,都隨洗液棄掉了.

      3.十二烷基硫酸鈉(sodium dodecylsulfate)遇到鉀離子后變成了十二烷基硫酸鉀(potassium dodecylsulfate, PDS),鉀離子置換了SDS中的鈉離子形成了不溶性的PDS,而高濃度 的鹽,使得沉淀更完全.大家知道SDS專門喜歡和蛋白質結合,平均兩個氨基酸上結合一個SDS分子,鉀鈉離子置換所產生的大量沉淀自然就將絕大部分蛋白質 沉淀了,讓人高興的是大腸桿菌的基因組DNA也一起被共沉淀了.這個過程不難想象,因為基因組DNA太長了,長長的DNA自然容易被PDS給共沉淀了,盡管SDS并不與DNA分子結合. 需要特別說明的是:醋酸的加入是為了中和NaOH,因為長時間的堿性條件會打斷DNA,所以要中和之.基因組DNA一旦發生斷裂,只要是50-100 kb大小的片斷,就沒有辦法再被PDS共沉淀了.所以堿處理的時間要短,而且不得激烈振蕩,不然最后得到的質粒上總會有大量的基因組DNA混入.

      河北三獅生物科技有限公司成立于2018年,是一家專注于核酸診斷原材料和分子工具酶等開發與生產的高新技術生物企業,致力于為生命科學與生物醫藥領域提供高品質的產品與服務。目前產品涵蓋生命科學研究相關基礎生物學試劑,以及食品安全、動物疫病、精準醫療等領域相關核心酶類制劑產品、分子診斷檢測類試劑盒。三獅生物在順應行業時代發展趨勢下持續創新,為合作伙伴創造價值,為樹立民族品牌不懈努力。


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